ف
كيف تحافظ على الببتيدات المركبة؟
تحتاج الببتيدات عمومًا إلى أن يتم تخزينها بعيدًا عن الضوء للتخزين طويل الأمد ، ويجب تخزينها في درجة حرارة -20 درجة ، ويمكن تخزينها في 4 درجات لفترة قصيرة.يمكن شحنها في درجة حرارة الغرفة لفترات قصيرة.تكون الببتيدات مستقرة عند -20 درجة مئوية ، خاصة عند التجفيف بالتجميد وتخزينها في مجفف.يمكن حفظ الببتيدات المجففة بالتجميد في درجة حرارة الغرفة قبل تعريضها للهواء.سيؤدي ذلك إلى تقليل تأثير الرطوبة ، وعندما لا يكون التجفيف بالتجميد ممكنًا ، فإن أفضل طريقة هي تخزين عينات العمل الصغيرة.بالنسبة للببتيدات التي تحتوي على Cys أو Met أو TrP ، فإن المخزن المؤقت لإزالة الأكسجين ضروري لحلها ، لأن هذا الببتيد يمكن أن يتأكسد بسهولة عن طريق الهواء ، كما أن غاز النيتروجين أو الهيدروجين الذي يتدفق ببطء عبر الببتيد قبل إغلاق الزجاجة سيقلل أيضًا من الأكسدة.الببتيدات التي تحتوي على GIn أو Asn هي أيضًا عرضة للتحلل ، وكل هذه الببتيدات لها عمر محدود مقارنة بتلك التي لا تحتوي على هذه البساطة الإشكالية.
ف
إذا كان الببتيد الخاص بي نقيًا بنسبة 95٪ ، فما النسبة المتبقية بنسبة 5٪؟
عادة ما يتم تحديد نقاء الببتيد بواسطة HPLC باستخدام تدرج بنسبة 1٪ أسيتونيتريل في الدقيقة.أثناء عملية التوليف ، لا يمكن أن تصل كفاءة الربط المتبادل بين الأحماض الأمينية دائمًا إلى 100٪ ، وبالتالي إنتاج سلسلة من الشوائب مع الأحماض الأمينية المفقودة.تمت إزالة معظم هذه الشوائب المحذوفة من الأحماض الأمينية أثناء التنقية ، ولكن القليل منها يحتوي على ملامح كروماتوجرافية تشبه إلى حد بعيد الببتيد المستهدف.الببتيدات الملوثة مع هذه الأحماض الأمينية المحذوفة المتبقية في عينة الببتيد تشكل النسبة القليلة المتبقية.
ف
كيف يتم تنقية الببتيدات؟
تستخدم تنقية الببتيد عمومًا عمود طور معكوس (مثل C8 ، C18 ، إلخ) ، 214 نانومتر.عادة ما يكون نظام المخزن المؤقت عبارة عن مذيب يحتوي على TFA ، درجة الحموضة 2.0.يحتوي المخزن المؤقت A على 0.1٪ TFA في H2O ، ويحتوي المخزن المؤقت B على 1٪ TFA / ACN / pH2.0.تذوب مع المخزن المؤقت أ قبل التنقية ؛إذا لم يكن الإذابة جيدًا ، فقم بحلها باستخدام Buffer B ثم قم بتخفيفها باستخدام Buffer A ؛بالنسبة للببتيدات شديدة المقاومة للماء ، يلزم أحيانًا إضافة كمية صغيرة من حمض الفورميك أو حمض الأسيتيك.تحليل HPLC لمنتجات الببتيد الخام ، إذا لم يكن الببتيد طويلًا (أقل من 15 مترًا) ، فستكون هناك ذروة رئيسية بشكل عام ، وعادة ما تكون القمة الرئيسية هي المنتج الكامل الطول ؛بالنسبة للببتيدات الطويلة التي تزيد عن 20 أمبير ، إذا لم يكن هناك ذروة رئيسية ، يجب استخدام HPLC مع الكتلة لتحديد الوزن الجزيئي ، ثم تحديد ذروة الببتيد المراد تصنيعه.
ف
كيف يجب التعامل مع نهايات الببتيد؟ احتفظ بها مجانًا أم قم بحظرها؟
تستخدم الببتيدات لمحاكاة البروتينات.من أجل محاكاة أداء البروتينات ، نحتاج إلى تخليق عديد الببتيدات بتركيبات وشحنات مماثلة للبروتينات.عندما يتم "قطع" الببتيد من البروتين ، فإن عدد الشحنات في كلا الطرفين سيكون مختلفًا عن عدد الشحنات الموجودة في بروتين الجسم الجيني.نحن بحاجة إلى تغيير استراتيجية التركيب لجعلها متسقة.بشكل عام: إذا كان التسلسل من الطرف C للبروتين ، قم بحماية الطرف N عن طريق الأسيتيل ؛إذا كان تسلسلًا من الطرف N للبروتين ، فقم بحماية الطرف C عن طريق التمركز ؛إذا كان من الجزء الأوسط من البروتين ، فاستخدم الأسيتيل والأوسط لحماية كلا الطرفين.
ف
ما هي مزايا الببتيدات المعدلة بـ PEG؟
تعديل البولي إيثيلين جلايكول هو إضافة بوليمر جزيئي عالي (إيثيلين جلايكول) إلى الجزيء المستهدف من خلال الترابط التساهمي.يخدع تعديل البولي إيثيلين جلايكول الجهاز المناعي للخلية المضيفة عن طريق تمويه البولي ببتيد ، ويعزز التأثير العلاجي لعديد الببتيد ، ويزيد من قابلية الذوبان والتوافر البيولوجي للأدوية الكارهة للماء.قد يطيل أيضًا دوران الببتيدات عن طريق تقليل التصفية الكلوية.
ف
ما الذي يجب الانتباه إليه عند إدخال تعديل الفلورسنت في الببتيدات؟
يقترح ببتيد KS-V إضافة رابط بين جزيء متعدد الببتيد وتعديل الفلورسنت ، والذي يمكن أن يقلل من تأثير تعديل الفلورسنت على طي البولي ببتيد والارتباط بالمستقبل.ومع ذلك ، إذا كان الغرض من تعديل التألق هو تحديد انتقال التألق بين الهياكل المختلفة ، فلا يوصى بإدخال رابط.
ف
ما الذي يجب الانتباه إليه عند تصميم الببتيدات المعدلة بالفسفرة؟
يوصي KS-V الببتيد أنه عند تصميم تعديلات الفسفرة ، يجب ألا يتجاوز تعديل الفسفرة 10 أحماض أمينية من الطرف N لتجنب انخفاض كفاءة الاقتران.
ف
يمكنك أن تفعل D- الببتيد؟ كم عدد أنواع الأحماض الأمينية الطبيعية من النوع D؟
يستطيع.هناك 19 نوعًا من الأحماض الأمينية الطبيعية من النوع D.لا يحتوي Gly الموجود في الأحماض الأمينية الطبيعية على هيكل مراوان ، ويمكن اختيار التركيب من النوع D للأحماض الأمينية الطبيعية الأخرى في ببتيد Keshengjing.لمزيد من التفاصيل ، يرجى تسجيل الدخول إلى الموقع الرسمي لعرض قائمة الأحماض الأمينية الخاصة.
ف
كم عدد مواقع الفسفرة التي يمكن تضمينها في تخليق الببتيد KS-V؟
بشكل عام ، هناك ثلاثة على الأكثر ، ويجب تحليلها وفقًا للتسلسل المحدد.
ف
لماذا تخضع عديد الببتيدات إلى أسيتيل طرفي N وتعديل وسط طرفي C؟
يمكن أن تمنح هذه التعديلات على تسلسل عديد الببتيد خصائص البروتين الأصلي.