الوصف:

باستخدام رسم خرائط الببتيد، يمكن تحديد التغييرات الدقيقة في الهيكل الأساسي للبروتين أو الجسم المضاد التي قد تؤثر على نشاط البروتين أو تقارب الارتباط.تعريف الببتيدات بواسطة LC-MS/MS هو واحد من أقوى الاختبارات النوعية لتأكيد التسلسل الأولي للبروتينات أو الأجسام المضادةيمكن استخدام هذه الخدمة لمقارنة مجموعات مختلفة من نفس البروتينات أو الأجسام المضادة أو الأدوية الحيوية المماثلة.

خدمة تحليل رسم خرائط الببتيدات بواسطة LC-MS/MS يشمل:

• يتم تشويه الأجسام المضادة / البروتين المثير للاهتمام ، وتقليصه ، وتهضم مع إنزيم بروتيوليتي مثل LysC أو التريبسين.
• اختياري: يتم استخدام إنزيم بروتيوليتي ثان لزيادة تغطية تسلسل البروتين.
• يتم فصل خليطات الببتيدات الناتجة على HPLC المعاكس. يتم إنشاء كروماتوجراف امتصاص الأشعة فوق البنفسجية عند الأشعة فوق البنفسجية 214 نانومتر.
• بعد فصل HPLC ، يتم إجراء مزيد من التحليل باستخدام طيف الكتلة عالي الدقة (Thermo Fisher Orbitrap Velos أو Fusion).
• يتم إنشاء خريطة الببتيد للبروتين للمقارنة مع بروتين المرجعية.
• يتم تحليل القمم إلى التسلسل الأساسي.
• اختياري (عينتين أو أكثر): يتم إجراء تقييم قابلية المقارنة لتقييم الاختلافات بين البروتينات أو المقارنة بين المواد المشابهة للحياة.

المعلومات المطلوبة:

• تأكيد التسلسلات الأولية (غطاء التسلسل: 60-90٪ باستخدام إنزيم واحد؛ > 98٪ باستخدام اثنين أو أكثر من الإنزيمات).
• تحديد مستويات الجليكوبروفيل من أوليغوساكاريدات المرتبطة بـ N (التباين بين الجليكوفورمات وتقريب احتلال الموقع).
• تحديد وتحديد كمية PTM تقريبًا مثل deamidation ، oxidation ،تشكيل البيروغلوتامات في المرحلة N ومعالجة ليز في المرحلة C (يمكن الكشف عن وضع الأحماض الأمينية المعدل و% التعديل).
• تقييم التشابه بين القطع المختلفة
• تقييم قابلية المقارنة للمواد الحيوية المشابهة.

معالجة العينة: التشويش والحد من الحمض النووي/الهيكل والهضم الإنزيمي تليها LC-MS أو LC-MS/MS.